摘要：乳雙歧桿菌U9是一株具有優(yōu)良益生功能的乳桿菌。為了保證U9菌株活性，為工業(yè)化益生菌制劑生產(chǎn)提供穩(wěn)定菌種，利用液氮深冷方式對U9菌株進(jìn)行冷凍保藏。以冷凍存活率為評價指標(biāo)，對冷凍保護(hù)劑種類進(jìn)行篩選，并對保護(hù)劑配方進(jìn)行正交試驗優(yōu)化。結(jié)果表明，甘油、海藻糖、脫脂乳粉及維生素C4種保護(hù)劑能對乳雙歧桿菌U9起到良好的保護(hù)作用；正交試驗優(yōu)化確定的保護(hù)劑配方為甘油2%、海藻糖7.5%、脫脂乳粉7.5%、維生素C 0.1%，菌體冷凍后存活率達(dá)到94%。氣相液氮罐

乳雙歧桿菌是人體腸道中常見的益生菌，也是世界上被廣泛研究的益生菌菌種之一，在維護(hù)人體健康中扮演重要角色。據(jù)統(tǒng)計，有300多種科學(xué)出版物都對乳雙歧桿菌功能特性進(jìn)行了描述，其中130多種報道涉及其人體臨床研究。大量報道表明，乳雙歧桿菌的保健作用已經(jīng)在許多胃腸健康和免疫功能臨床研究中得到了驗證。目前，人們已經(jīng)把乳雙歧桿菌制備成了發(fā)酵乳制品的直投發(fā)酵劑、膳食補充劑以及藥用制劑等。

在乳雙歧桿菌工業(yè)化使用過程中，菌種活力的保持與工業(yè)化生產(chǎn)緊密相關(guān)。傳統(tǒng)的保菌方式主要是采用真空冷凍干燥的方法，但存在設(shè)備成本較高、菌種存活率低等問題。

因此，探究一種更為簡便的保菌方式顯得尤為重要。液氮深冷保菌方式因其實驗操作簡便、成本較低、菌種活力高等優(yōu)勢，越發(fā)廣泛地應(yīng)用到菌種保藏中。有研究采用3%甘油、5%海藻糖、5%果糖、8%脫脂乳、0.05%維生素C、0.05%L－谷氨酸（L－ＧLU）作為保護(hù)劑配方，對長雙歧桿菌起到良好保護(hù)作用，保證在深冷條件下存活率接近100%。針對不同菌株研究特異性冷凍保護(hù)劑是菌株深冷保藏的關(guān)鍵。

冷凍保護(hù)劑分為滲透型、非滲透型、半滲透型和抗氧化型4種，不同類型保護(hù)劑的保護(hù)機制也不同。氣相液氮罐

液氮深冷冷凍技術(shù)，能耗小，安全性高，生產(chǎn)成本低，能較好地提升菌種的存活率，為菌種的保藏提供了更有效便捷的方式。冷凍保藏效果的關(guān)鍵在于冷凍保護(hù)劑的選擇，通過對保護(hù)劑種類進(jìn)行篩選，確定了甘油、海藻糖、脫脂乳粉和維生素C4種保護(hù)劑，它們能夠?qū)θ殡p歧桿菌U9在液氮中的冷凍保藏起到良好的保護(hù)作用，并借助正交試驗及驗證試驗對保護(hù)劑濃度進(jìn)行優(yōu)化，確定保護(hù)劑配方為2%甘油、7.5%海藻糖、7.5%脫脂乳粉、0.1%維生素C。利用優(yōu)化后的保護(hù)劑配方對乳雙歧桿菌U9進(jìn)行凍干保護(hù)，存活率可達(dá)94%，為乳雙歧桿菌U9在工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。