這些化學(xué)試劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)可防止內(nèi)膜的冷凍損傷。 儲(chǔ)存在低溫容器內(nèi)的細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)有必要當(dāng)心操作。當(dāng)小管被加熱時(shí)，所構(gòu)成的 冰晶會(huì)將細(xì)胞殺死，正確操作就可防止這種事端。只需敏捷將樣品凍結(jié)就能削減 生機(jī)的丟掉，做法是：將封口的小管敏捷放入 37℃的水中，直至一切的冰消融，然后翻開(kāi)管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。 超低溫保藏的微生物有必要一直儲(chǔ)存在溫度十分低的環(huán)境中，因而需求液氮罐。

　　在長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存的過(guò)程中有必要常常注意彌補(bǔ)液氮。 這種儲(chǔ)存辦法比凍干法需求更多的經(jīng)費(fèi)，包含為了保持儲(chǔ)存溫度所必要的勞動(dòng)力和液氮等。

　　1 資料病毒超低溫保管所需資料有：熱收縮塑料管(NuncCryoflex) ，液氮罐，防護(hù)手套和面罩，記號(hào)筆，氣體噴燈，裝液氮的保溫瓶。

　　2 辦法

　　(1)剪一段兩頭各超出冷凍管長(zhǎng)度 2cm 的熱收縮塑料管。

　　(2)將富含弄清病毒懸液(安排培養(yǎng)的上清培養(yǎng)基，或安排培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì) 胞溶解產(chǎn)品均可)冰浴幾分鐘，用滅菌移液管將 0.2ml 冰浴過(guò)的上清懸液分裝到冷凍管內(nèi)，并將蓋子擰緊。

　　(3)將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部，刺進(jìn)正確的標(biāo)簽。

　　(4)用噴燈當(dāng)心加熱熱收縮塑料管，并使之包住冷凍管。注意不要用太高 的溫度加熱熱收縮塑料管。

　　(5)再當(dāng)心加熱熱收縮塑料管的兩頭，用大號(hào)鑷子夾緊管的端口至徹底密 封。

　　(6)將密封好的冷凍管疾速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍(操作時(shí)需求戴面 罩和手套) 。

　　(7)將冷凍過(guò)的冷凍管放入液氮罐中的格子內(nèi)，一起記載樣品的具體的存 放方位、試驗(yàn)編號(hào)和寄存日期等。

　　(8)需求用時(shí)，敏捷從液氮罐內(nèi)取出所需樣品，并投入 37℃水浴箱中凍結(jié)后，用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開(kāi)熱收縮塑料管。擰開(kāi)冷凍管的蓋子時(shí)不需求除掉熱收縮塑料管。